Hồng y Angelo De Donatis sinh ngày 4 tháng 1 năm 1954 tại Casarano, Giáo phận Nardò, Italia. Sau quá trình tu học dài hạn tại các cơ sở chủng viện theo quy định của Giáo luật, ngày 12 tháng 4 năm 1980, Phó tế Donatis, 267 tuổi, tiến đến việc được truyền chức linh mục tại Nhà thờ San Domenico, Casarano, Giáo phận Nardò. Cử hành nghi thức truyền chức cho tân linh mục là giám mục Antonio Rosario Mennonna, giám mục chính tòa Giáo phận Nardò. Tân linh mục đồng thời cũng là thành viên linh mục đoàn Giáo phận Nardò. Ba năm sau đó, ông chính thức được gia nhập vào linh mục đoàn Giáo phận Rôma, kể từ ngày 28 tháng 11 năm 1983.[2]

Từ năm 1989 đến năm 1991, De Donatis là nhân viên lưu trữ của Tổng Thư ký Hồng y đoàn.[3] Ông trở thành Giám đốc linh hướng của Chủng viện giáo hoàng Rôma, nơi ông phục vụ cho đến năm 2003, khi ông được bổ nhiệm làm linh mục giáo xứ tại nhà thờ San Marco Evangelista al Campidoglio tại Roma,[4] kiêm chức Trợ lý cho Hiệp hội quốc gia về người thân của giáo sĩ.[5] Ông cũng từng là giám đốc ban giáo sĩ của vị Giám quản Rôma từ năm 1990 đến năm 1996. Sau đó ông trở thành một thành viên của hội đồng mục vụ và Hội đồng Tư vấn của Giáo phận Roma.[3]